A . 引物的长度为18～25bpB . 引物内部不能存在连续的互补序列，防止产生二聚体和发夹结构C . 引物中G+C的含量占45%～55%D . 引物的3′端可以带有生物素、荧光素或酶切位点E . 两条引物的Tm值应该尽量相近
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