A . A．引入某些限制酶切位点。
B . 人工构建载体。
C . C．增加调控元件。
D . 调整阅读框。
E . E．通过接头引入与目的基因相同的限制酶位点，并对目的基因相应酶切点进行甲基化修饰保护，可保护目的基因不受限制酶破坏。