母牛的发情鉴定操作：1）外部观察：观察母牛是否有发情的外部表现如哞叫、兴奋不安；外阴是否肿胀、有无粘液流出及粘液的量和状态。2）阴道检查：用阴道开放器打开母牛阴道，借手电筒观察阴道粘膜的颜色和子宫颈口的开张情况。3）直肠检查：术者经准备后，一手伸入母牛直肠内，寻找卵巢，触摸是否有卵泡发育并判定发育的阶段。